Bu çalışmada 2013-123 no’lu bilimsel araştırma projeleri kapsamında laboratuarımızda devam eden çalışmalarda aşırı ortam olarak yüksek sıcaklık değerine sahip Kütahya ili Simav ilçesinde bulunan Naşa ve Çitgöl Termal kaplıcasından elde edilen izolatların hücre dışı proteaz enzimi üretim belirlenmesi amaçlanmıştır. Proteolitik aktiviteleri bakımından taranan izolatlar spesifik enzim aktivitelerine göre değerlendirilmiş ve en yüksek aktiviteyi gösteren ve Ç2-1 olarak kodlanan izolat Geobacillus subterraneus Ç2-1 olarak tanılanmıştır.
Geobacillus subterraneus Ç2-1 izolatının proteaz üretim yeteneği üzerine çeşitli faktörlerin etkisi incelenmiş ve üretim ortamının optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla en uygun başlangıç pH değeri, karbon ve azot kaynakları ve bu kaynakların miktarları, inokulum miktarı, inkübasyon sıcaklığı ve süre değerleri Plackett- Burman Deney Tasarım Yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. Ç2-1 izolatı için en yüksek proteaz aktivitesi karbon kaynağı olarak %1,49 glikoz, azot kaynağı olarak %0,26 maya özütü kullanıldığında ve %3,23’lük inokulum oranında, 75°C’de 168 saatlik inkübasyon sonucunda, pH 5,5’de gözlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda üretilen proteaz enziminin karakterizasyonu amacıyla yapılan çalışmalarda enzimin optimum reaksiyon sıcaklığı 95°C ve optimum reaksiyon pH değeri 8 olarak bulunmuştur.
In this study, determination of extracellular protease enzyme production by isolates obtained from Nasa and Citgol thermal springs (Kutahya, Simav) having high temperature value as extreme environment at the studies ongoing in our laboratories in the scope of 2013-123 scientific research Project was aimed. The isolates screened for proteolitic activity were investigated for spesific enzyme activities and Ç2-1 coded isolate exhibited higher protease enzyme activity and was identified Geobacillus subterraneus Ç2-1.
The effects of various factors on the abilities of protease production of Geobacillus subterraneus Ç2-1 isolate were investigated and the optimization of production medium was carried out. For this purpose, the optimum initial pH, carbon and nitrogen sources, the amounts of these sources, inoculum amount, incubation temperature, incubation time were defined using Plackett Burman experimental design. For Ç2-1 isolate, when 1.49% of glucose as carbon source, 0.26% of yeast extract as nitrogen source, 3.23% of inoculum amount, 75 °C of incubation temperature, 168 hours of incubation time, and pH 5.5 were used, the highest protease activity was provided. For the characterization studies of protease enzyme produced at determined optimum conditions, 95 °C of optimum reaction temperature and 8 of optimum reaction pH were found.