Bu çalışmada tirozinaz enziminin kompetitif inhibitörlerinin tayini için tirozinaz temelli enzimatik biyosensör geliştirilmiştir. Bu amaç doğrultusunda tirozinaz enzimi immobilizasyon materyali olarak jelatin ve çapraz bağlayıcı reaktif olarak glutaraldehid kullanılarak çözünmüş oksijen probu membranı yüzeyinde immobilize edildi. Substrat olarak fenol kullanıldı. Hazırlanan biyosensörde öncelikle kompetitif inhibitör denemeleri yapıldı. İnhibitör olarak sistein, sodyum metabisülfit, tiyoüre, glutationun denenmiş olup inhibitör davranışları gözlendi. Optimizasyon çalışmalarında en iyi inhibitör cevabı alınan sistein kullanıldı. Yapılan çalışmalarda en uygun enzim miktarı 53 U/cm², jelatin miktarı 5 mg jelatin/cm², glutaraldehid yüzdesi % 2,5 belirlendi. Çalışma koşullarının optimizasyonu için yapılan denemelerde optimum çalışma ortamı olarak (50 mm) pH:7 olan potasyum fosfat tamponunun kullanılmasına ve ölçümlerin 35°C'de yapılması gerektiğine karar verildi. Geliştirilen biyosensörün karakterizasyon çalışmaları sonucunda 250 mM ve 1000 mM inhibitör konsantrasyonu aralığında doğrusal sonuçlar alındı. Aynı enzimin operasyonel kararlılığı da belirlendi.
In this study, a tyrosinase based biosensor was developed for determination of the competitive inhibitors of tyrosinase.To construct the biosensor tyrosinase enzyme was immobilized by using gelatine and cross-linking agent glutaraldehyde on a dissolved oxygen probe covered with a teflon membran which is sensitive for oxygen. Phenol is used as a substrat. Firstly examine the inhibitors cystein, sodium metabisülfit, tiyoure and glutation. In the optimization studies cystein was used because it?s inhibitor effect showed the best result. The optimum enzyme activity 53U/cm2 , 5mg gelatine and 2,5% glutaraldehid concentration was determined. Optimum p H and and temperature were found at p H 7 and 35ºC. The inhibitor concentrations between 250 mM to 1000 mM showed lineer results with this biosensor. Operational stability was studied for this enzyme.
