Hücre bölünmesinin belli bir sayıdan sonra son bulması veya kesintisiz
devam etmesi, telomer boy uzunlugu ve telomeraz aktivitesi ile iliskilidir. Telomeraz
enzim kompleksi bir ribonükleoprotein kompleksi olup, yapısında telomeraz RNA’sı
(TR, TERC), telomeraz proteini (TERT) ve yardımcı proteinler bulunur.
Siyalik asitler, hücrelerin birbirini tanımasında, nöron gelisiminin
uyarılmasında, hücre göçü ve hücreler arası bütünlügünün saglanmasında görev alırlar.
Kanser metastazı ve malignansilerde telomeraz aktivitesi ve siyalik asidin
normal dokulara göre artmıs olarak bulunması, bu iki parametrenin tümör marker’ı
olarak kullanılabilecegini göstermektedir.
Çalısmamızda, insan glioma (DK-MG) ve sıçan glioma (C6) hücre dizisi
kültürlerinden elde edilen hücre ekstratlarında; telomeraz aktivitesi, siyalik asit düzeyi,
hücre zarında nöronal hücre baglantı molekülü NCAM’ın varlıgı, telomeraz RNA’sı
(TR) ve telomeraz revers transkriptaz (TERT) ekspresyonunu degerlendirerek,
telomeraz aktivitesi ile siyalik asit düzeylerinin pasajdan pasaja gösterdikleri
degisimleri incelemeyi amaçladık.
Çalısmamızda kullandıgımız DK-MG hücre dizisi için RPMI, C6 hücre
dizisi için DMEM/F12 besiyeri kullanılarak hücreler 37oC’de CO2’li etüvde inkübe
edildi. 3.,6.,9.,12 ve 15. pasajlarda TRAP yöntemi ile telomeraz aktivitesi belirlendi.
Siyalik asit miktarları spektrofotometrik olarak ölçülerek tesbit edildi. Ayrıca bu
örneklerde telomeraz aktivitesinin sonuçlarını desteklemek için RT-PCR yöntemi ile
TERT, TR ekspresyonları ve immunohistokimyasal boyama yöntemi ile de hücre
zarındaki NCAM gösterildi.
Çalısmamızda, DK-MG ve C6 hücre dizilerinin ilerleyen pasajlarında, her
iki hücre dizisinde, telomeraz aktivitesi ve siyalik asidin birbirine paralel olarak arttıgı
gözlendi. TR ve TERT ekspresyonları pozitif olarak bulundu. NCAM, birbirlerine
benzer sekilde boyandı. Kültüre edilen her iki glioma hücre dizisinin ilerleyen
x
pasajlarında telomeraz aktivitesi ve siyalik asidin artması, malignansi ve invazyonda
olan artıs ile iliskilendirilebilir. Glial tümör hücre dizilerinin ilerleyen pasajlarında,
telomeraz aktivitesinde görülen artıs sürekli olmayıp inis ve çıkıslar göstermektedir.
Siyalik asit miktarı ise, telomeraz aktivitesine göre, ilerleyen pasajlarda, daha düzenli
olarak artmaktadır. Bu nedenle glial tümörler için yapılan tetkiklerin yanında, telomeraz
aktivitesi ve özellikle siyalik asit miktarı tesbitinin, tümörün durumunu belirlemede ve
tedaviyi yönlendirmede destekleyici bir parametre olarak kullanılabilecegi
kanaatindeyiz.
Termination or non-stop continuation of the cell cycle is related to telomere
length and telomerase activity. Telomerase is a ribonucleoprotein complex, and it
contains telomerase RNA (TR, TERC), telomerase protein (TERT) and associated
proteins.
Sialic acids play a role in the recognition of cells each other, cell migration
and maintenance of inter-cellular integrity.
Telomerase activity in metastases and malignancies, and increased sialic
acid levels compared with normal tissues indicate that these parameters could be used as
tumor markers.
In our study, we evaluated telomerase activity, sialic acid levels, existence
of neuronal cell adhesion molecule (NCAM) in cell membrane, expression of
telomerase RNA and telomerase reverse transcriptase in cell extracts from the human
(DK-MG) and rat (C6) glioma cell lines. We purposed to investigate the alterations of
telomerase activity and sialic acid levels in the cell line passages to passages.
Cells were incubated in RPMI and DMEM/F12 growth mediums for DKMG and C6 cell lines, respectively, at 37oC in a CO2 contained incubator. Telomerase
activity was determined using TRAP method, and sialic acid level was determined using
spectrophotometry, in third, 6th, 9th, 12th, and 15th passages. In addition, TERT and TR
expressions using RT-PCR, NCAM in cell membrane by immuno-histochemical
staining were showed to support the results of the telomerase activity.
Increased telomerase activity and sialic acid levels were observed, compared
with each other in the later passages of DK-MG and C6 cell lines. TR and TERT
expressions were found as positive. NCAMs were stained similarly with each other.
Increased telomerase activity and sialic acid levels in the later passages of both cultured
glioma cell lines may indicate malignancy and invasion. In the later passages of glioma
cell lines, telomerase activity was not increased continuously and linearly, it showed
xii
reducing and rising pattern. Sialic acid levels in the later passages showed a more
regular rising than telomerase activity. We are coinvinced that, determination of
telomerase activity and especially sialic acid with examination in glial tumors will be
used in finding tumor situation and directing therapy as supporting parametres
