Kanser hücrelerinde sfingolipid metabolizmasının ikincil habercilerinden olan
seramid molekülünün miktarındaki artışın hücre bölünmesini durdurduğu ve apoptozun
indüklenmesinde rol oynadığı daha önce yapılan çalışmalarla farklı hücre hatlarında
gösterilmiştir. Seranib-2 seramidaz enzim inhibitörü olarak sentezlenen hücrede seramid
miktarında artışa neden olan bir ajandır.
Çalışmada ilk olarak seranib-2’nin ve pozitif kontrol olarak seçilen karboplatinin 1,
5, 10, 25, 50, 75 ve 100 μM dozlarının hücre çoğalması üzerindeki etkileri MTT
yöntemiyle araştırılmıştır. Seranib-2’nin A549 hücrelerinde 24 ve 48 saatteki IC50 değerleri
sırasıyla, 22 ve 18 μM; H460 hücrelerinde ise 8 ve 3 μM olarak hesaplanmıştır.
Karboplatinin ise sadece H460 hücrelerinde 48 saatlik uygulamasında IC50 değeri 55 μM
olarak hesaplanmıştır. Ardından her iki hücre hattında da seranib-2 ve karboplatin dozları
1:1 oranında kombine olarak uygulanmıştır. A549 hücrelerinde 24 saatte tüm dozlarda
antogonistik etki, 48 saatte 1 ve 5 μM dozları dışında kalan diğer dozlarda sinerjistik etki
görülmüştür. H460 hücrelerinde ise 24 saatte 10 ve 25 μM dozlarında sinerjistik etki
görülürken, diğer dozlarda ve 48 saat uygulamalarında antogonistik etki gözlenmiştir.
Seçilen seranib-2 dozlarının her iki hücrede DNA fragmentasyonunu arttığı, apoptotik
fragmentasyonun nekrotik olana kıyasla daha fazla olduğu belirlenmiştir. H460
hücrelerinde seramidaz enzimin doza bağlı olarak seranib-2 tarafından baskılandığı ELISA
yöntemiyle belirlenmiştir. Son olarak seçilen seranib-2 dozlarının her iki hücre hattında da
apoptotik süreçle ilgili CASP3, CASP9 ve BAX genlerinin ifadesini artırırken, BCL-2
geninin ifadesini azalttığı gözlenmiştir.
Sonuç olarak; seranib-2 dozlarının KHDAK hücre hatlarında hücre canlılığını doza
ve zamana bağlı olarak azalttığı ve apoptozu indüklediği, karboplatin ile birlikte kombine
denendiğinde oluşturduğu antagonistik/sinerjistik etkileşim ilk kez tespit edilmiştir.
The increasing amount of ceramide, the secondary messenger molecule of
sphingolipid metabolism, has been shown to play role in stopping cell division and
inducing apoptosis in cancer cell lines by various studies. Ceranib-2 is an inhibitory agent
which inhibits ceramidase activation and causes an increase in the amount of ceramide in
cells.
In our research, first we investigated the antiproliferative effects of 1, 5, 10, 25, 50,
75 and 100 μM doses of ceranib-2 and carboplatin which is choosen as a positive control
by MTT assay. The IC50 values of ceranib-2 for 24 and 48 h are; 22 and 18 μM on A549
cells respectively, 8 and 3 μM on H460 cells respectively. However carboplatin has an
inhibitory effect (IC50= 55 μM) only on H460 cells by 48 h application. Then both
compound were applied in 1:1 ratio for each drug doses as combination on both cell lines.
In combination therapy, antagonistic effect at all doses in 24 h, synergistic effect at all
doses except 1 and 5 μM for 48 h was observed in A549 cells. In H460 cells, synergism
only at 10 and 25 μM for 24 h and antagonism for the rest of dose applications was
observed for 24 and 48 h. Selected ceranib-2 doses have increased DNA fragmentation on
both cell lines, apoptotic was greater than necrotic fragmentation. The inhibition of
ceramidase enzyme activity by ceranib-2 in H460 cells was determined by ELISA assay.
Finally, it is observed that the expression of apoptotic process related genes; CASP3,
CASP9 and BAX were increased while BCL-2 was reduced by selected doses of ceranib-2
in both cell lines.
As a result, the inhibition effects on cell viability and apoptosis of ceranib-2 doses
in a dose and time depended manner in NSCLC cell lines was determined for the first time.
Also the antagonistic/synergistic interactions by combination with carboplatin were
identified for the first time.
